制備液相色譜是色譜法的一個重要分支，以液體為流動相，采用高壓輸液系統，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相泵入裝有固定相的色譜柱，在柱內各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現對試樣的分析。該方法已成為化學、醫學、工業、農學、商檢和法檢等學科領域中重要的分離分析技術應用。
一般柱長在2—250mm，柱越長，分離度越高，但柱壓更高，分離所需時間更長;但分離度與理論塔板數的平方根成正比，所以一昧增加柱長并不是zui有效的分離手段，一般情況下，150mm、5um的填料可以提供足夠的塔板數。
正相色譜n流動相極性小于固定相極性的分配色譜法稱為正相分配色譜。常用的分析柱有：n氨基柱、氰基柱、硅膠柱。n常用流動相為極性小的有機溶劑。反相色譜n流動相極性大于固定相極性的分配色譜法稱為反相分配色譜法。常用的分析柱有：ODS(C18)，C8，C2。n常用流動相為甲醇-水，乙腈-水。
空間排斥色譜n也稱凝膠色譜，依據被分離組分分子尺寸與凝膠空徑大小之間的相對關系而分離，類似于分子篩作用。在一定分子線團尺寸內，分子越大，保留時間越短。凝膠滲透——以有機溶劑為流動相凝膠過濾——以水溶液為流動相對于相同化學組成的高分子化合物，其分子尺寸大小與分子量成正比，因此凝膠色譜可以研究高分子化合物的分子量分布。
制備液相色譜時，配制流動相應用新鮮水，水質要求越高放置時間越短。理想的HPLC用水應為0.055μS/cm的超純水，并通過0.22μm的濾膜，除去熱源、有機物、無機離子及空氣等。
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